杜仲配方顆粒｜提高理論塔板數的2種解決方案

艾思吉實驗室小故事

杜仲配方顆?！?/strong>

提高理論塔板數的2種解決方案

故事發生在風光正好的初夏里

一位憂傷的小仙女找到了艾思吉

小仙女，窗外風光甚好，你在這愁啥呢？

艾思吉老師，我在做杜仲配方顆粒含量測定項目，把實驗室的色譜柱都試一遍了，可是對照品溶液中目標化合物松脂醇二葡萄糖苷的理論塔板數都不符合要求，最 好的一個也才八千多，標準中要求大于10000。

小仙女別著急。容我想想……是不是采樣點數不夠啊，你把采樣頻率調大試試。

幾乎沒有什么變化呢。

emm…看來不是因為這個，是不是條件不合適。你試試提高柱溫，看看有改善嘛。

40度條件下理論塔板數沒有明顯變化，但峰型變好很多。

看來不同柱溫對理論塔板數也影響不大。既然40度條件下，峰型更佳，那后續就在40度柱溫條件下優化吧。

好的。對了，艾思吉老師。奇怪的是同一個條件下，供試品溶液中松脂醇二葡萄糖苷理論塔板數能達到一萬呢。

對照品溶液和供試品溶液的溶劑一樣嗎？

我看看啊……不一樣，對照品溶液溶劑是純甲醇，供試品的提取溶劑是70%甲醇。

那流動相呢，流動相條件是什么？

甲醇-水（25:75）

emmmm......

艾思吉老師您是不是有新的思路了。

是不是過載，又或者是不是溶劑效應呢？這樣，先試一下降低進樣量；再試一下進樣量不變，對照品溶液的溶劑換成70%甲醇？

哇塞，果然有效。

看來還真的是溶劑效應。

溶劑效應

目前公認的對溶劑效應的理解是樣品溶劑洗脫強度大于流動相洗脫強度時產生的色譜峰變形的現象。比如100%純乙腈溶解樣品，注入流動相為乙腈-水（18：82）的反相系統中，會造成色譜峰分叉或前延的現象。但是這種概念不能解釋其他由于所選稀釋劑導致的峰變形現象。所以我們將溶劑效應的概念延伸，溶劑效應，就是由于樣品中某些組分在樣品溶劑與流動相所處的狀態的較大差異導致的色譜行為表現異常的情況。

但是，藥典要求不允許更改溶劑，也不能改進樣量呢。

那可以試試使用儀器上的Co-injection進樣模式。

Co-injection 模式

此模式相較傳統直接進樣（標準模式）可以在不改變樣品溶劑條件下去除溶劑效應，改善峰型，提高定量靈敏度。尤其當樣品溶液為高比例有機溶劑時，可以直接進樣分析而無需擔心溶劑效應。

哇塞，Co-injection模式進樣果然也同樣有效。這個方法不錯，不用改溶劑，只需要在軟件上簡單設置就行了。十分感謝，幫我解決了大問題了。

不客氣。不過，如果我們嘗試優化流動相中有機相比例的話，能接受么？

可以的，艾思吉老師，只要在藥典允許的范圍內條件即可。

好的，那我們換個思路，不使用Co-injection進樣功能，只優化下有機相比例，看看對理論塔板數有沒有影響。分別增大和降低有機相比例，我們都試一下。

降低有機相比例，也可以噠。

太好了，那這個方案適合儀器上沒有Co-injection進樣功能的時候。

溶劑效應解決辦法

1、 用流動相做樣品溶劑或降低樣品溶劑的洗脫能力。

2、 增大流動相的洗脫能力。

3、 使用儀器的在線稀釋

（Co-injection）功能。

4、 降低進樣量。

5、 改變柱前管路規格：對于梯度洗脫而言，在不影響分離度的情況下，可以改用較粗內徑的柱前管路。

注意：若是等度洗脫，此方法會降低柱效；若是梯度洗脫，基本不影響柱效

謝謝艾思吉老師，溶劑效應還能影響理論塔板數呢，真是漲見識了～

還有一個問題，供試品中有很多保留太強的雜質，我設置的分析時間一針80min，還是有雜質會殘留到下一針，有沒有好的解決方案。

可以在目標峰出峰后，加一段增大有機相比例到70%并沖吸一段時間，再回到初始流動相比例，這樣能把保留強的雜質在較短時間沖洗出來。

這個方法太贊了，大大縮短了分析時間，提高了工作效率。

十分感謝。針對杜仲配方顆粒中松脂醇二葡萄糖苷的測定，幫我們建立了兩個完整的解決方案。

方案01

色譜條件

對照品溶液色譜圖及結果：

供試品溶液色譜圖及結果：

方案02

色譜條件

對照品溶液色譜圖及結果：

供試品溶液色譜圖及結果：

一鍵@艾思吉

點擊或掃描左邊二維碼，填寫您的問題反饋，讓艾思吉助您一臂之力～